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如何選擇合適的內參抗體？

如何選擇合適的內參抗體？Tips：在選擇內參抗體時，我們需要遵循幾個原則：1.種屬來源哺乳動物的樣本需要選擇哺乳動物中穩定表達的蛋白作為內參，同樣的，植物樣本需要選擇植物中穩定表達的蛋白作為內參。2.細胞定位靶標蛋白的細胞定位不同，適合的內參也不同。如全細胞裂解液可選擇beta-actin、beta-tubulin等，膜蛋白一般選擇NaKATPase，核蛋白則選擇LaminB1、HistoneH3等。3.分子量內參蛋白的分子量需要與目標蛋白的分子量有所區別，否則兩者條帶無法分...

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TUNEL法細胞凋亡檢測假陽性率高怎么破？

TUNEL法基于對細胞DNA損傷的檢測，通常可用于檢測組織切片樣本和細胞樣本，是晚期細胞凋亡檢測中常用的方法。那么對于檢測過程中常見的假陽性率高的現象是如何產生的呢？1.固定操作不當固定液選擇不恰當，固定液濃度過高，固定時間過長，組織切片過厚都會影響固定效果。一般建議選擇含4%多聚甲醛的PBS溶液來固定細胞或組織切片，時間在30min左右。2.基因轉錄水平高基因轉錄活性高的非凋亡細胞會產生假陽性，例如睪丸組織。3.激發光下長時間照射在強激發光長時間照射下，高濃度的PI會吸收能...

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原代細胞分離與培養

原代細胞(primarycell)是指從生物體獲取細胞直接培養。通常，把培養的第1代細胞與傳10代以內的細胞統稱為原代細胞培養。由于細胞剛從活體組織分離出來，因此原代細胞更接近于生物體內的生活狀態，且生物性狀尚未發生很大改變。這一方法可為研究生物體細胞的生長、代謝、繁殖提供有力的手段，同時也為以后傳代培養創造條件。原代細胞的分離與培養常用的原代細胞培養方法有組織塊培養和分散組織培養。組織塊培養：是將剪碎的組織塊直接移植在培養瓶壁上，加入培養基后進行培養。組織塊培養法是常用的、...

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